近年来发展起来的1H—1H和1H—13C COSY等二维核磁共振谱已应用在灵芝三萜结构的测定中。
5.旋光光谱：旋光光谱主要是解决绝对构型问题，从文献报道的CD谱数据总结出CD谱与绝对构型关系；凡是具有[I]式绝对构型者，C7为羟基，不管3位或15位是羟基或羰基取代，CD谱都呈现下列Cotton效应，（290～295）nm（—），（248～257）nm（+），（207～217）nm（—）；凡是在[I]式结构中C7为酮基者，则不管3位或15位的取代基如何，都呈现如下Cotton效应：（305～307）nm（—），（272～278）nm（+），（253～256）nm（—），（225～231）nm（+）。
Nishitoba等人在鉴定epoxyganoderiol A的绝对构型时，应用CD谱确定了C24和C25的绝对构型。在epoxyganoderiol A的侧链上存在着一个环氧基团，为了确定24和25位是S还是R，首先以羊毛甾醇为原料，经反应得到S和R两种构型的化合物，反应如下：
a)AC2O/pyridine, b) SeO2/dioxane, c) NaBH4/CeCl3·7H2O/MeOH-THF
d)(+)-DETor (-) -DET/Ti (O1Pr) 4/TBHP/CH2Cl2
分别将7b和7a溶于CCl4溶液中，加入Eu（fod）3络合物，测其旋光谱，得到如下结果：
以上两个化合物的CD谱的Cotton效应是与C25的Newman投影相一致的。正Cotton效应为25S负Cotton效应为25R。在相同条件下测epoxyganoderiol A的CD谱，显示313nm（△ε+10.9）为正Cotton效应，证明25位的绝对构型为S，通过测定NOE，证实24位绝对构型为S。
（三）结构测定中的化学反应
随着仪器分析新技术、新方法的发展，各类谱学方法和X射线—衍射等分析手段已在结构测定中得到了广泛的应用。经典的化学方法与仪器分析相结合，使三萜化合物的结构测定快速而准确并达到了微量的水平。化学反应常用于证实分子骨架中取代基类型、数目、位置及构型等。
1.氧化反应 氧化反应主要用来确定分子中所含羟基、羰基或酰基的数目和位置等。应用较多的是将羟基氧化成羰基，比较常用的是铬酐—吡啶的方法，也有将铬酐溶于AcOH中搅拌加入样品中，室温下搅拌2h，用水稀释，氯仿提取，提取液经水洗干燥浓缩后经薄层制备而得到氧化产物。
2.酰化反应 酰化反应对于确定分子中羟基的数目、性质、构型很有帮助，常用的乙酰化反应，通常采用醋酐—吡啶室温处理的方法。
3.水解 由于部分灵芝三萜酸中带有乙酰基，为确定乙酰基的存在和数目，采用了水解的方法，如Komoda将ganoderic acid F溶于甲醇，用5%Na2CO3室温处理3h后，用2mol/L HCl酸化，除去甲醇后用CHCl3萃取，水洗CHCl3液后Na2SO4干燥，蒸干。通过TLC制备得水解产物。
4.还原 还原反应主要用来确定分子中有无不饱和双键及羟基、羰基、取代基的位置。如Nishitoba等人在确定lucidenato G结构时，为了证实C26位上存在着羟基，先将lucidenate G甲基化，然后再用NaBH4进行还原，得到其丙酮化物，从而证实了C26位存在着一个羟基。